Протокол експерименту
Відсоток цитотоксичності розраховується за наведеним нижче рівнянням.
Цитотоксичність % = (Контроль у реальному часі – Кількість оброблених у реальному часі) / Підрахунок живого контролю × 100
Позначаючи цільові пухлинні клітини нетоксичним, нерадіоактивним кальцеїном AM або трансфікуючи GFP, ми можемо контролювати вбивство пухлинних клітин клітинами CAR-T.Хоча живі клітини-мішені ракові клітини будуть мічені зеленим кальцеїном AM або GFP, мертві клітини не можуть утримувати зелений барвник.Hoechst 33342 використовується для фарбування всіх клітин (як Т-клітин, так і пухлинних клітин), в якості альтернативи, клітини-мішені можна забарвити мембранно-зв'язаним кальцеїном AM, PI використовується для фарбування мертвих клітин (як Т-клітин, так і пухлинних клітин).Ця стратегія фарбування дозволяє розрізняти різні клітини.
E: T Цитотоксичність K562, що залежить від співвідношення
Прикладом флуоресцентних зображень Hoechst 33342, CFSE, PI є клітини-мішені K562 при t = 3 години.
Отримані флуоресцентні зображення продемонстрували збільшення Hoechst+CFSE+PI+ цільових клітин із збільшенням співвідношення E:T
