اے او پی آئی ڈوئل فلوروسیس کاؤنٹنگ پرکھ کی قسم ہے جو سیل کے ارتکاز اور قابل عملیت کا پتہ لگانے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔حل ایکریڈائن اورنج (سبز فلوروسینٹ نیوکلک ایسڈ داغ) اور پروپیڈیم آئوڈائڈ (سرخ فلوروسینٹ نیوکلک ایسڈ داغ) کا ایک مجموعہ ہے۔پروپیڈیم آئوڈائڈ (PI) ایک جھلی خارج کرنے والا رنگ ہے جو صرف سمجھوتہ شدہ جھلیوں والے خلیوں میں داخل ہوتا ہے، جبکہ ایکریڈائن اورنج آبادی کے تمام خلیوں میں گھسنے کے قابل ہوتا ہے۔جب دونوں رنگ نیوکلئس میں موجود ہوتے ہیں تو پروپیڈیم آئوڈائڈ فلوروسینس ریزوننس انرجی ٹرانسفر (FRET) کے ذریعے ایکریڈائن اورنج فلوروسینس میں کمی کا سبب بنتا ہے۔نتیجے کے طور پر، برقرار جھلیوں والے نیوکلیٹیڈ خلیے فلوروسینٹ سبز رنگ کے داغ دیتے ہیں اور انہیں زندہ شمار کیا جاتا ہے، جب کہ سمجھوتہ شدہ جھلیوں والے نیوکلیٹیڈ خلیے صرف فلوروسینٹ سرخ داغ دیتے ہیں اور Countstar® FL سسٹم کا استعمال کرتے وقت مردہ شمار کیے جاتے ہیں۔غیر جوہری مواد جیسے سرخ خون کے خلیات، پلیٹلیٹس اور ملبہ فلوریس نہیں ہوتے ہیں اور Countstar® FL سافٹ ویئر کے ذریعہ نظر انداز کیا جاتا ہے۔
اسٹیم سیل تھراپی کا عمل
شکل 4 سیل کے علاج میں استعمال کے لیے mesenchymal اسٹیم سیلز (MSCs) کی عملداری اور سیل کی گنتی کی نگرانی۔
AO/PI اور Trypan Blue Assay کے ذریعے MSC کی قابل عملیت کا تعین کریں۔
شکل 2. A. AO/PI اور Trypan Blue کے ذریعے داغدار MSC کی تصویر؛2. ٹرانسپورٹ سے پہلے اور بعد میں AO/PI اور Trypan بلیو نتیجہ کا موازنہ۔
سیل ریفریکٹیو انڈیکس بدل جاتا ہے، ٹریپین بلیو سٹیننگ اتنا واضح نہیں تھا، نقل و حمل کے بعد قابل عملیت کا تعین کرنا مشکل ہے۔جب کہ دوہرے رنگ کا فلوروسینس زندہ اور مردہ نیوکلیٹیڈ خلیوں کے داغدار ہونے کی اجازت دیتا ہے، ملبے، پلیٹلیٹس، اور خون کے سرخ خلیوں کی موجودگی میں بھی درست قابل عمل نتائج پیدا کرتا ہے۔
