Annotatsiya: Mezenximal ildiz hujayralari mezodermadan ajratilishi mumkin bo'lgan pluripotent ildiz hujayralarining bir qismidir.O'z-o'zini takrorlashning yangilanishi va ko'p yo'nalishli differentsiatsiya xususiyatlari bilan ular tibbiyotda turli xil davolash usullari uchun yuqori salohiyatga ega.Mezenximal ildiz hujayralari noyob immun fenotipi va immunitetni tartibga solish qobiliyatiga ega.Shu sababli, mezenximal ildiz hujayralari allaqachon ildiz hujayra transplantatsiyasi, to'qima muhandisligi va organ transplantatsiyasida keng qo'llaniladi.Va bu ilovalardan tashqari, ular to'qimalar muhandisligida bir qator asosiy va klinik tadqiqot tajribalarida urug'lantiruvchi hujayralar sifatida ideal vosita sifatida ishlatiladi.Hozirgacha mezenximal ildiz hujayralari sifatini nazorat qilishning keng tarqalgan usuli va standarti mavjud emas.Countstar Rigel ushbu ildiz hujayralarini ishlab chiqarish va farqlash jarayonida kontsentratsiyani, hayotiyligini va fenotip xususiyatlarini (va ularning o'zgarishini) kuzatishi mumkin.Countstar Rigel shuningdek, hujayra sifatini monitoring qilish jarayonida doimiy yorug'lik maydoni va floresansga asoslangan tasvir yozuvlari bilan ta'minlangan qo'shimcha morfologik ma'lumotlarni olishda afzalliklarga ega.Countstar Rigel ildiz hujayralari sifatini nazorat qilish uchun tez, murakkab va ishonchli usulni taklif etadi.
Materiallar va uslublar:
Yog'dan olingan mezenximal ildiz hujayralari (AdMSCs) professor Nianmin Qi, AO / PI bo'yash eritmasi (Shanxay RuiYu, CF002) tomonidan sovg'a qilingan.Antikor: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD kompaniyasi).
AdMSC 37 ℃, 5% CO2 namlangan inkubatorda yetishtirildi.Ishlatishdan oldin tripsin bilan hazm qiling.
Antikor qo'llanmasi sifatida CD markerni bo'yash jarayoni kuzatildi.
Countstar Rigel yordamida CD markerni aniqlash:
1. PE kanalini tasvir PE floresansiga o'rnatish orqali signal rangini qo'llash tartibi yaratildi.
2. Har bir kameradan 3 ta dala qo'lga olindi.
3. Tasvirlash va dastlabki tahlil tugallangandan so'ng, ijobiy va salbiy transfeksiya uchun pol (log eshigi) sozlamalari FCS dasturi tomonidan o'rnatildi.
Ildiz hujayra sifatini nazorat qilish
Quyidagi rasmda (1-rasm) protsedura ko'rsatilgan ildiz hujayra terapiyasi .
1-rasm: Ildiz hujayralarini davolash tartibi
Natijalar:
AdMSC ning kontsentratsiyasini, hayotiyligini, diametrini va agregatsiyasini aniqlash.
AdMSC larning hayotiyligi AO/PI tomonidan aniqlandi, Yashil kanal va Qizil kanalni tasvir AO va PI floresansiga, shuningdek yorqin maydonga o'rnatish orqali ikki rangli dastur protsedurasi yaratildi.Misol tasvirlar 2-rasmda ko'rsatilgan.
Shakl 2. AdMSClarni tashishdan oldin va tashishdan keyingi tasvirlar.A. Tashishdan oldin;vakili tasvir ko'rsatiladi.B. Tashishdan keyin;vakili tasvir ko'rsatiladi.
AdMSC ning hayotiyligi tashishdan oldingi bilan solishtirganda tashishdan keyin keskin o'zgardi.Tashishdan oldin yashovchanlik 92% ni tashkil etgan bo'lsa, tashishdan keyin u 71% gacha kamaydi.Natija 3-rasmda ko'rsatilgan.
Shakl 3. AdMSC ning hayotiylik natijalari (tashishdan oldin va tashishdan keyin)
Diametri va agregatsiyasi ham Countstar Rigel tomonidan aniqlangan.AdMSC diametri tashishdan oldingi bilan solishtirganda tashishdan keyin keskin o'zgardi.Tashishdan oldingi diametr 19 µm edi, lekin tashishdan keyin u 21 µm gacha oshdi.Tashishdan oldin yig'ish 20% ni tashkil etgan bo'lsa, tashishdan keyin 25% gacha ko'tarildi.Countstar Rigel tomonidan olingan tasvirlardan AdMSC ning fenotipi tashishdan keyin keskin o'zgargan.Natijalar 4-rasmda ko'rsatilgan.
4-rasm: diametri va yig'ish natijalari.Javob: AdMSC-larning vakillik tasvirlari, AdMSC-larning fenotipi tashishdan keyin keskin o'zgardi.B: Tashishdan oldin yig'ish 20% ni tashkil etdi, lekin tashishdan keyin u 25% gacha ko'tarildi.C: Tashishdan oldingi diametr 19 µm edi, lekin tashishdan keyin u 21 µm gacha oshdi.
Countstar Rigel tomonidan AdMSC ning immunofenotipini aniqlang
AdMSC larning immunofenotipi Countstar Rigel tomonidan aniqlangan, AdMSClar mos ravishda turli antikorlar (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR) bilan inkubatsiya qilingan.PE floresansini tasvirlash uchun Yashil kanalni va yorqin maydonni o'rnatish orqali signal rangini qo'llash tartibi yaratildi.Yorqin maydon tasvirining mos yozuvlar segmentatsiyasi PE floresan signalini namuna olish uchun niqob sifatida qo'llanildi.CD105 natijalari ko'rsatilgan (5-rasm).
5-rasm: AdMSC ning CD105 natijalari Countstar Rigel tomonidan aniqlandi.Javob: FCS express 5 plus dasturi orqali turli namunalardagi CD105 ning ijobiy foizini miqdoriy tahlil qilish.B: Yuqori sifatli tasvirlar qo'shimcha morfologik ma'lumot beradi.C: Natijalar har bir hujayraning eskizlari bo'yicha tasdiqlangan, FCS dasturiy vositalari hujayralarni turli xil protein ifodalariga ko'ra turli guruhlarga ajratdi.
Boshqa antikorlar natijalari 6-rasmda ko'rsatilgan
Shakl 6: A: tipik shpindel shaklidagi morfologiyaga ega ASClarning vakili tasviri.OLYMPUS mikroskopi tomonidan olingan.Asl kattalashtirish, (10x).B: ASClarning adipogenik farqlanishi mineralizatsiya joylarini ko'rsatadigan Rutenium Qizil bo'yalishi bilan tasdiqlanadi.OLYMPUS mikroskopi tomonidan olingan.Asl kattalashtirish (10x).C: ASClarning Countstar FL xarakteristikasi.
Xulosa:
Countstar FL ushbu ildiz hujayralarini ishlab chiqarish va farqlash jarayonida kontsentratsiyani, hayotiyligini va fenotip xususiyatlarini (va ularning o'zgarishlarini) kuzatishi mumkin.FCS express har bir signal xujayrasini ko'rib chiqish, tasvir orqali ma'lumotlarni tekshirish funktsiyasini ta'minlaydi.Shuningdek, foydalanuvchi Countstar Rigel natijalari asosida keyingi tajribalarni o'tkazishga ishonchiga ega bo'lishi mumkin.Countstar Rigel ildiz hujayralari sifatini nazorat qilish uchun tez, murakkab va ishonchli usulni taklif etadi.
