Hệ thống Countstar kết hợp máy đo tế bào hình ảnh và máy đếm tế bào thành một thiết bị đặt trên băng ghế dự bị duy nhất.Hệ thống chụp ảnh tế bào tự động, nhỏ gọn và được điều khiển bởi ứng dụng này cung cấp giải pháp tất cả trong một để nghiên cứu tế bào ung thư, bao gồm đếm tế bào, khả năng tồn tại (AO / PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC / PI), tế bào chu kỳ (PI), và truyền GFP / RFP.
trừu tượng
Ung thư là một trong những nguyên nhân chính gây tử vong trên toàn thế giới, và việc phát triển các phương pháp điều trị ung thư mới có ý nghĩa rất lớn.Tế bào ung thư là đối tượng nghiên cứu cơ bản của bệnh ung thư, các thông tin khác nhau cần được đánh giá từ tế bào ung thư.Lĩnh vực nghiên cứu này cần phân tích tế bào nhanh chóng, đáng tin cậy, đơn giản và chi tiết.Hệ thống Countstar cung cấp một nền tảng giải pháp đơn giản để phân tích tế bào ung thư.
Nghiên cứu quá trình chết của tế bào ung thư bởi Countstar Rigel
Các xét nghiệm apoptosis thường được sử dụng trong nhiều phòng thí nghiệm cho nhiều mục đích khác nhau, từ đánh giá sức khỏe của tế bào nuôi cấy đến đánh giá độc tính của một nhóm hợp chất.
Xét nghiệm apoptosis là một loại được sử dụng để xác định tỷ lệ phần trăm apoptosis của tế bào bằng phương pháp nhuộm Annexin V-FITC / PI.Annexin V liên kết với phosphatidylserine (PS) với tế bào apoptosis sớm hoặc tế bào hoại tử.PI chỉ xâm nhập vào các tế bào chết hoại tử / giai đoạn rất muộn.(Hình 1)
A ： Quá trình apoptosis sớm Annexin V (+), PI (-)
B ： Apoptosis muộn Annexin V (+), PI (+)
Hình 1: Chi tiết phóng to của ảnh Countstar Rigel (độ phóng đại 5 x) của 293 ô, được xử lý bằng Annexin V FITC và PI
Phân tích chu kỳ tế bào của tế bào ung thư
Chu kỳ tế bào hay chu kỳ phân chia tế bào là một chuỗi các sự kiện diễn ra trong tế bào dẫn đến sự phân chia và nhân đôi DNA của nó (sao chép DNA) để tạo ra hai tế bào con.Ở tế bào có nhân, cũng như ở sinh vật nhân thực, chu kỳ tế bào cũng được chia thành ba thời kỳ: giữa các pha, pha nguyên phân (M) và phân bào.Propidium iodide (PI) là một loại thuốc nhuộm nhuộm hạt nhân thường được sử dụng để đo chu kỳ tế bào.Bởi vì thuốc nhuộm không thể xâm nhập vào các tế bào sống, các tế bào được cố định bằng ethanol trước khi nhuộm.Tất cả các tế bào sau đó được nhuộm màu.Các tế bào chuẩn bị cho quá trình phân chia sẽ chứa lượng DNA ngày càng tăng và hiển thị lượng huỳnh quang tăng theo tỷ lệ.Sự khác biệt về cường độ huỳnh quang được sử dụng để xác định tỷ lệ phần trăm tế bào trong mỗi pha của chu kỳ tế bào.Countstar có thể chụp ảnh và kết quả sẽ được hiển thị trong phần mềm FCS express.(Hình 2)
Hình 2: MCF-7 (A) và 293T (B) được nhuộm bằng Bộ phát hiện chu kỳ tế bào với PI, kết quả được xác định bởi Countstar Rigel, và phân tích bằng FCS express.
Xác định khả năng tồn tại và sự truyền nhiễm GFP trong tế bào
Trong quá trình xử lý sinh học, GFP thường được sử dụng để dung hợp với protein tái tổ hợp làm chất chỉ thị.Xác định GFP huỳnh quang có thể phản ánh sự biểu hiện của protein mục tiêu.Countstar Rigel cung cấp một xét nghiệm nhanh chóng và đơn giản để kiểm tra khả năng lây nhiễm GFP cũng như khả năng sống sót.Tế bào được nhuộm bằng Propidium iodide (PI) và Hoechst 33342 để xác định quần thể tế bào chết và tổng số tế bào.Countstar Rigel đưa ra một phương pháp nhanh chóng, định lượng để đánh giá hiệu quả biểu hiện GFP và khả năng tồn tại cùng một lúc.(Hinh 4)
Hình 4: Các tế bào được định vị bằng cách sử dụng Hoechst 33342 (xanh lam) và có thể dễ dàng xác định được tỷ lệ phần trăm của các tế bào biểu hiện GFP (xanh lục).Tế bào không thể sống được được nhuộm bằng propidium iodide (PI; màu đỏ).
Khả năng tồn tại và số lượng ô
AO / PI Đếm huỳnh quang kép là loại xét nghiệm được sử dụng để phát hiện nồng độ, khả năng sống sót của tế bào.Nó chia thành đếm dòng tế bào và đếm tế bào sơ cấp theo loại tế bào khác nhau.Dung dịch chứa sự kết hợp của vết axit nucleic huỳnh quang màu lục, acridine da cam, và vết axit nucleic huỳnh quang đỏ, propidium iodide.Propidium iodide là một loại thuốc nhuộm loại trừ màng chỉ xâm nhập vào các tế bào có màng bị tổn thương trong khi acridine cam xâm nhập vào tất cả các tế bào trong quần thể.Khi cả hai chất nhuộm đều có mặt trong nhân, propidium iodide gây ra sự giảm huỳnh quang màu da cam của acridine bằng cách truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET).Kết quả là các tế bào có nhân có màng nguyên vẹn nhuộm màu xanh lục huỳnh quang và được tính là sống, trong khi các tế bào có nhân có màng bị tổn thương chỉ nhuộm màu đỏ huỳnh quang và được tính là đã chết khi sử dụng hệ thống Countstar Rigel.Vật liệu không có nhân như tế bào hồng cầu, tiểu cầu và mảnh vụn không phát huỳnh quang và bị phần mềm Countstar Rigel bỏ qua.(Hình 5)
Hình 5: Countstar đã tối ưu hóa phương pháp nhuộm huỳnh quang kép để xác định đơn giản, chính xác nồng độ và khả năng sống sót của PBMC.Các mẫu nhuộm bằng AO / PI có thể được phân tích bằng Counstar Rigel
