Đếm huỳnh quang kép AOPI là loại xét nghiệm được sử dụng để phát hiện nồng độ và khả năng sống sót của tế bào.Dung dịch là sự kết hợp của acridine da cam (vết axit nucleic huỳnh quang màu lục) và propidium iodide (vết axit nucleic huỳnh quang màu đỏ).Propidium iodide (PI) là thuốc nhuộm loại trừ màng chỉ xâm nhập vào các tế bào có màng bị tổn thương, trong khi acridine cam có thể xâm nhập vào tất cả các tế bào trong quần thể.Khi cả hai chất nhuộm đều có mặt trong nhân, propidium iodide gây ra sự giảm huỳnh quang màu da cam của acridine bằng cách truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET).Kết quả là các tế bào có nhân có màng nguyên vẹn nhuộm màu xanh lục huỳnh quang và được tính là sống, trong khi các tế bào có nhân có màng bị tổn thương chỉ nhuộm màu đỏ huỳnh quang và được tính là đã chết khi sử dụng hệ thống Countstar® FL.Vật liệu không có nhân như tế bào hồng cầu, tiểu cầu và mảnh vụn không phát huỳnh quang và bị phần mềm Countstar® FL bỏ qua.
Quy trình trị liệu tế bào gốc
Hình 4 Theo dõi khả năng tồn tại và số lượng tế bào của tế bào gốc trung mô (MSC) để sử dụng trong các liệu pháp tế bào.
Xác định khả năng tồn tại của MSC bằng xét nghiệm AO / PI và Trypan Blue
Hình 2. A. Hình ảnh MSC được nhuộm bởi AO / PI và Trypan Blue;2. So sánh kết quả AO / PI và Trypan blue trước và sau khi vận chuyển.
Chỉ số khúc xạ của tế bào thay đổi, việc nhuộm Trypan Blue không quá rõ ràng, rất khó xác định khả năng tồn tại sau khi vận chuyển.Trong khi huỳnh quang hai màu cho phép nhuộm các tế bào có nhân sống và chết, tạo ra kết quả khả năng sống chính xác ngay cả khi có các mảnh vụn, tiểu cầu và tế bào hồng cầu.
