די Countstar סיסטעם קאַמביינז די בילד סיטאָמעטער און צעל טאָמבאַנק אין אַ איין באַנק-שפּיץ קיילע.די אַפּלאַקיישאַן-געטריבן, סאָליד און אָטאַמייטיד צעל ימאַגינג סיסטעם גיט אַן אַלע-אין-איין לייזונג פֿאַר ראַק צעל פאָרשונג, אַרייַנגערעכנט צעל קאַונטינג, ווייאַבילאַטי (AO/PI, Trypan Blue), אַפּאָפּטאָסיס (Annexin V-FITC/PI), צעל. ציקל (פּי), און גפפּ / רפפּ טראַנספעקשאַן.
אַבסטראַקט
ראַק איז איינער פון די הויפּט סיבות פון טויט ווערלדווייד, און די אַנטוויקלונג פון נייַע ראַק באַהאַנדלונג מעטהאָדס איז פון גרויס באַטייַט.ראַק צעל איז די גרונט פאָרשונג כייפעץ פון ראַק, פאַרשידן אינפֿאָרמאַציע דאַרף זיין עוואַלואַטעד פון די ראַק צעל.דעם פאָרשונג געגנט דאַרף גיך, פאַרלאָזלעך, פּשוט און דיטיילד צעל אַנאַליסיס.Countstar סיסטעם גיט אַ פּשוט לייזונג פּלאַטפאָרמע פֿאַר ראַק צעל אַנאַליסיס.
לערנען קאַנסער צעל אַפּאָפּטאָסיס דורך Countstar Rigel
אַפּאָפּטאָסיס אַססעס זענען רוטינלי געניצט אין פילע לאַבאָראַטאָריעס פֿאַר פאַרשידן צוועקן, פֿון אַססעסס די געזונט פון צעל קאַלטשערז צו יוואַליוייטינג די טאַקסיסאַטי פון אַ טאַפליע פון קאַמפּאַונדז.
אַפּאָפּטאָסיס איז אַ טיפּ געניצט פֿאַר דיטערמאַנינג די אַפּאָפּטאָסיס פּראָצענט פון סעלז דורך אַנעקסין V-FITC / פּי סטיינינג אופֿן.אַנעקסין V ביינדז צו פאָספאַטידילסערינע (פּס) מיט פרי אַפּאָפּטאָסיס צעל אָדער נאַקראָוסאַס צעל.פּי נאָר גייט אריין נעקראָטיק / זייער שפּעט-בינע אַפּאָפּטאָטיק סעלז.(פיגורע 1)
א: פרי אַפּאָפּטאָסיס אַנעקסין V (+), פּי (-)
ב: שפּעט אַפּאָפּטאָסיס אַנעקסין V (+), פּי (+)
פיגור 1: ענלאַרגעד דעטאַילס פון Countstar Rigel בילדער (5 קס מאַגנאַפאַקיישאַן) פון 293 סעלז, באהאנדלט מיט Annexin V FITC און PI
צעל ציקל אַנאַליסיס פון ראַק צעל
דער צעל ציקל אָדער צעל-אָפּטיילונג ציקל איז די סעריע פון געשעענישן וואָס נעמען אָרט אין אַ צעל וואָס פירן צו זיין אָפּטייל און דופּליקיישאַן פון זייַן דנאַ (דנאַ רעפּלאַקיישאַן) צו פּראָדוצירן צוויי טאָכטער סעלז.אין צעלן מיט אַ קערן, ווי אין עוקאַריאָטעס, די צעל ציקל איז אויך צעטיילט אין דרייַ פּיריאַדז: ינטערפאַסע, די מיטאָטיש (M) פאַסע, און סיטאָקינעסאַס.פּראָפּידיום יאָדידע (פּי) איז אַ יאָדער סטיינינג פאַרב וואָס איז אָפט געניצט צו מעסטן צעל ציקל.ווייַל די פאַרב קענען נישט אַרייַן לעבן סעלז, די סעלז זענען פאַרפעסטיקט מיט עטאַנאָל איידער סטיינינג.אַלע פון די סעלז זענען דעמאָלט סטיינד.סעלז פּריפּערינג פֿאַר אָפּטייל וועט אַנטהאַלטן ינקריסינג אַמאַונץ פון דנאַ און ווייַזן פּראַפּאָרשנאַלי געוואקסן פלורעסאַנס.דיפפערענסעס אין פלואָרעססענסע ינטענסיטי זענען געניצט צו באַשטימען דעם פּראָצענט פון סעלז אין יעדער פאַסע פון די צעל ציקל.Countstar קענען כאַפּן די בילד און רעזולטאַטן וועט זיין געוויזן אין FCS עקספּרעסס ווייכווארג.(פיגורע 2)
פיגורע 2: MCF-7 (A) און 293T (B) זענען סטיינד מיט צעל ציקל דעטעקשאַן קיט מיט פּי, די רעזולטאַטן זענען באשלאסן דורך Countstar Rigel און אַנאַלייזד דורך FCS עקספּרעסס.
ווייאַבילאַטי און GFP טראַנספעקשאַן באַשטימונג אין צעל
בעשאַס די ביאָפּראָסעסס, GFP איז אָפט געניצט צו פיוס מיט רעקאָמבינאַנט פּראָטעין ווי אַ גראדן.באַשטימען די GFP פלורעסאַנט קענען שפיגלט די ציל פּראָטעין אויסדרוק.Countstar Rigel אָפפערס אַ שנעל און פּשוט אַססיי פֿאַר טעסטינג GFP טראַנספעקשאַן און ווייאַבילאַטי.סעלז זענען סטיינד מיט פּראָפּידיום יאָדידע (פּי) און Hoechst 33342 צו דעפינירן די טויט צעל באַפעלקערונג און גאַנץ צעל באַפעלקערונג.Countstar Rigel אָפפערס אַ שנעל, קוואַנטיטאַטיווע אופֿן פֿאַר יוואַליוייטינג GFP אויסדרוק עפעקטיווקייַט און ווייאַבילאַטי אין דער זעלביקער צייט.(פיגורע 4)
פיגורע 4: סעלז זענען ליגן ניצן Hoechst 33342 (בלוי) און די פּראָצענט פון גפפּ יקספּרעסינג סעלז (גרין) קענען זיין לייכט באשלאסן.נאָנוויאַבלע צעל זענען סטיינד מיט פּראָפּידיום יאָדידע (פּי; רויט).
ווייאַבילאַטי און צעל גראף
AO / PI צווייענדיק-פלאָרעססעס קאַונטינג איז די אַססיי טיפּ געניצט פֿאַר דיטעקטינג צעל קאַנסאַנטריישאַן, ווייאַבילאַטי.עס איז צעטיילט אין צעל שורה קאַונטינג און ערשטיק צעל קאַונטינג לויט צו פאַרשידענע צעל טיפּ.די לייזונג כּולל אַ קאָמבינאַציע פון די גרין-פלורעסאַנט נוקלעיק זויער פלעק, אַקרידין מאַראַנץ, און די רויט פלורעסאַנט נוקלעיק זויער פלעק, פּראָפּידיום יאָדידע.פּראָפּידיום יאָדידע איז אַ מעמבראַנע יקסקלוזשאַן פאַרב וואָס נאָר גייט אריין סעלז מיט קאַמפּראַמייזד מעמבריינז בשעת אַקרידין מאַראַנץ פּענאַטרייץ אַלע סעלז אין אַ באַפעלקערונג.ווען ביידע דיעס זענען פאָרשטעלן אין די קערן, פּראָפּידיום ייאַדייד ז אַ רעדוקציע אין אַקרידין מאַראַנץ פלואָרעססענסע דורך פלואָרעססענסע אפקלאנג ענערגיע אַריבערפירן (FRET).ווי אַ רעזולטאַט, נוקלעאַטעד סעלז מיט בעשאָלעם מעמבריינז פלעק פלורעסאַנט גרין און זענען גערעכנט ווי לעבעדיק, כוועראַז נוקלעאַטעד סעלז מיט קאַמפּראַמייזד מעמבריינז בלויז פלעק פלורעסאַנט רויט און זענען גערעכנט ווי טויט ווען ניצן די Countstar Rigel סיסטעם.ניט-נוקלעאַטעד מאַטעריאַל אַזאַ ווי רויט בלוט סעלז, פּלאַטעלעץ און דעבריס טאָן ניט פלואָרעסס און זענען איגנאָרירט דורך די Countstar Rigel ווייכווארג.(פיגורע 5)
פיגורע 5: Countstar האט אָפּטימיזעד אַ צווייענדיק פלואָרעססענסע סטיינינג אופֿן פֿאַר פּשוט, פּינטלעך פעסטקייַט פון PBMC קאַנסאַנטריישאַן און ווייאַבילאַטי.סאַמפּאַלז סטיינד מיט אַאָ / פּי קענען זיין אַנאַלייזד מיט די קאָונסטאַר ריגעל
