Eto Countstar daapọ cytometer aworan ati counter cell sinu ohun elo ibujoko kan ṣoṣo.Ohun elo-ìṣó, iwapọ, ati eto aworan sẹẹli adaṣe n pese ojutu gbogbo-ni-ọkan fun iwadii sẹẹli alakan, pẹlu kika sẹẹli, ṣiṣeeṣe (AO/PI, blue trypan), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), sẹẹli ọmọ (PI), ati GFP/RFP gbigbe.
Áljẹbrà
Akàn jẹ ọkan ninu awọn okunfa akọkọ ti iku ni agbaye, ati idagbasoke awọn ọna itọju alakan tuntun jẹ pataki nla.Awọn sẹẹli alakan jẹ nkan iwadii ipilẹ ti akàn, ọpọlọpọ alaye nilo lati ṣe iṣiro lati sẹẹli alakan.Agbegbe iwadii yii nilo iyara, igbẹkẹle, rọrun ati itupalẹ sẹẹli alaye.Eto Countstar n pese aaye ojutu ti o rọrun fun itupalẹ sẹẹli alakan.
Ṣe iwadi Apoptosis Cell Cancer nipasẹ Countstar Rigel
Awọn igbelewọn Apoptosis jẹ igbagbogbo lo ni ọpọlọpọ awọn ile-iṣere fun awọn idi oriṣiriṣi lati ṣe iṣiro ilera ti awọn aṣa sẹẹli si iṣiro majele ti nronu ti awọn agbo ogun.
Apoptosis assay jẹ iru ti a lo fun ṣiṣe ipinnu ipin ogorun apoptosis ti awọn sẹẹli nipasẹ ọna idoti Annexin V-FITC/PI.Annexin V sopọ mọ phosphatidylserine (PS) pẹlu sẹẹli apoptosis tete tabi sẹẹli negirosisi.PI nikan wọ inu necrotic / awọn sẹẹli apoptotic ti o pẹ pupọ.(Aworan 1)
A: Apoptosis ni kutukutu Annexin V (+), PI (-)
B: Apoptosis pẹ Annexin V (+), PI (+)
Nọmba 1: Awọn alaye ti o gbooro ti awọn aworan Countstar Rigel (5 x magnification) ti awọn sẹẹli 293, ti a tọju pẹlu Annexin V FITC ati PI
Seli ọmọ Analysis of akàn Cell
Yiyipo sẹẹli tabi yiyipo pipin sẹẹli jẹ lẹsẹsẹ awọn iṣẹlẹ ti o waye ninu sẹẹli ti o yori si pipin ati ẹda-iwe ti DNA rẹ (atunṣe DNA) lati gbe awọn sẹẹli ọmọbinrin meji jade.Ninu awọn sẹẹli ti o ni arin, bi ninu awọn eukaryotes, ọna sẹẹli tun pin si awọn akoko mẹta: interphase, ipele mitotic (M), ati cytokinesis.Propidium iodide (PI) jẹ awọ didanu iparun ti a lo nigbagbogbo lati wiwọn iyipo sẹẹli.Nitoripe awọ ko le wọ inu awọn sẹẹli laaye, awọn sẹẹli ti wa ni titọ pẹlu ethanol ṣaaju si abawọn.Gbogbo awọn sẹẹli lẹhinna ni abariwon.Awọn sẹẹli ti n murasilẹ fun pipin yoo ni awọn iye DNA ti n pọ si ati ṣafihan iwọn itanna ti o pọ si ni iwọn.Awọn iyatọ ninu kikankikan fluorescence ni a lo lati pinnu ipin ogorun awọn sẹẹli ni ipele kọọkan ti iyipo sẹẹli.Countstar le ya aworan naa ati awọn abajade yoo han ni sọfitiwia kiakia FCS.(Aworan 2)
Nọmba 2: MCF-7 (A) ati 293T (B) ti ni abawọn pẹlu Apo-iwari wiwa sẹẹli pẹlu PI, awọn abajade ti pinnu nipasẹ Countstar Rigel, ati itupalẹ nipasẹ FCS express.
Ṣiṣe ṣiṣeeṣe ati Ipinnu Gbigbe GFP ni Cell
Lakoko ilana bioprocess, GFP nigbagbogbo ni a lo lati dapọ pẹlu amuaradagba atunmọ gẹgẹbi itọkasi.Ṣe ipinnu fluorescent GFP le ṣe afihan ikosile amuaradagba afojusun.Countstar Rigel nfunni ni idanwo iyara ati irọrun fun idanwo gbigbe GFP daradara bi ṣiṣeeṣe.Awọn sẹẹli ti ni abawọn pẹlu Propidium iodide (PI) ati Hoechst 33342 lati ṣalaye iye awọn sẹẹli ti o ku ati lapapọ iye sẹẹli.Countstar Rigel nfunni ni iyara, ọna pipo fun iṣiro ṣiṣe ikosile GFP ati ṣiṣeeṣe ni akoko kanna.(Aworan 4)
Nọmba 4: Awọn sẹẹli wa ni lilo Hoechst 33342 (buluu) ati ipin ogorun ti awọn sẹẹli ti n ṣalaye GFP (alawọ ewe) le ni rọọrun pinnu.Awọn sẹẹli ti ko ṣee ṣe jẹ abawọn pẹlu propidium iodide (PI; pupa).
Iwaṣeeṣe ati Iwọn sẹẹli
AO/PI Meji-fluoresces kika jẹ iru idanwo ti a lo fun wiwa ifọkansi sẹẹli, ṣiṣeeṣe.O pin si kika ila sẹẹli ati kika sẹẹli akọkọ ni ibamu si oriṣi sẹẹli.Ojutu naa ni idapo ti alawọ-fluorescent nucleic acid idoti, osan acridine, ati abawọn redfluorescent nucleic acid, propidium iodide.Propidium iodide jẹ awọ imukuro awọ ara ti o wọ inu awọn sẹẹli nikan pẹlu awọn membran ti o gbogun lakoko ti osan acridine wọ gbogbo awọn sẹẹli ninu olugbe kan.Nigbati awọn awọ mejeeji ba wa ni arin, propidium iodide nfa idinku ninu acridine osan fluorescence nipasẹ fluorescence resonance energy transfer (FRET).Bi abajade, awọn sẹẹli ti a ti sọ di mimọ pẹlu awọn membran ti ko tọ di alawọ ewe Fuluorisenti ati pe a kà wọn si laaye, lakoko ti awọn sẹẹli iparun pẹlu awọn membran ti o gbogun nikan di pupa Fuluorisenti a si ka bi okú nigba lilo eto Countstar Rigel.Awọn ohun elo ti kii ṣe iparun gẹgẹbi awọn sẹẹli ẹjẹ pupa, awọn platelets ati idoti ko tan imọlẹ ati pe a kọbiara si nipasẹ sọfitiwia Countstar Rigel.(Aworan 5)
Nọmba 5: Countstar ti ṣe iṣapeye ọna idoti meji-fluorescence fun irọrun, ipinnu deede ti ifọkansi PBMC ati ṣiṣeeṣe.Awọn ayẹwo ti o ni abawọn pẹlu AO/PI ni a le ṣe atupale pẹlu Countstar Rigel
