Ṣiṣayẹwo awọn leukocytes ninu gbogbo ẹjẹ jẹ iṣiro igbagbogbo ni laabu ile-iwosan tabi banki ẹjẹ.Ifojusi ati ṣiṣeeṣe ti awọn leukocytes jẹ atọka pataki bi iṣakoso didara ti ipamọ ẹjẹ.Yato si leukocyte, gbogbo ẹjẹ ni nọmba nla ti awọn platelets, awọn sẹẹli ẹjẹ pupa, tabi awọn idoti cellular, eyiti o jẹ ki ko ṣee ṣe lati ṣe itupalẹ gbogbo ẹjẹ taara labẹ microscope tabi kọnputa sẹẹli aaye didan.Awọn ọna aṣa lati ka awọn sẹẹli ẹjẹ funfun jẹ ilana ilana RBC lysis, eyiti o jẹ akoko-n gba.
AOPI Meji-fluoresces kika jẹ iru idanwo ti a lo fun wiwa ifọkansi sẹẹli ati ṣiṣeeṣe.Ojutu jẹ apapo ti osan acridine (awọ-awọ-awọ-awọ nucleic acid idoti) ati propidium iodide (pupa-fluorescent nucleic acid idoti).Propidium iodide (PI) jẹ awọ iyasoto awọ ara ti o wọ inu awọn sẹẹli nikan pẹlu awọn membran ti o gbogun, lakoko ti osan acridine ni anfani lati wọ gbogbo awọn sẹẹli ninu olugbe kan.Nigbati awọn awọ mejeeji ba wa ni arin, propidium iodide nfa idinku ninu acridine osan fluorescence nipasẹ fluorescence resonance energy transfer (FRET).Bi abajade, awọn sẹẹli ti a ti sọ di mimọ pẹlu awọn membran ti ko ni abawọn di alawọ ewe Fuluorisenti ati pe wọn ka bi laaye, lakoko ti awọn sẹẹli iparun pẹlu awọn membran ti o gbogun nikan ni abawọn pupa fluorescent ati pe wọn ka bi okú nigba lilo eto Countstar® Rigel.
Countstar Rigel jẹ ojuutu pipe fun ọpọlọpọ awọn igbelewọn isọdasilẹ olugbe sẹẹli ti o nipọn, mu ṣiṣẹ lati ṣe itupalẹ awọn sẹẹli-ẹjẹ funfun ni odidi ẹjẹ ni iyara.
Ilana Idanwo:
1.Mu 20 µl ti ayẹwo ẹjẹ ati dilute ayẹwo ni 180 µl ti PBS.
2.Fi 12µl AO / PI ojutu sinu ayẹwo 12µl, rọra dapọ pẹlu pipette;
3.Fa 20µl adalu sinu ifaworanhan iyẹwu;
4.Gba awọn sẹẹli laaye lati yanju ni iyẹwu fun ayika 1 iṣẹju;
5.Insect ifaworanhan sinu ohun elo Countstar FL;
6.Yan awọn ayẹwo "AO / PI Viability", lẹhinna Tẹ ID Ayẹwo fun apẹẹrẹ yii.
7.Select Dilution ratio, Cell Type, awọn tẹ 'Run' lati bẹrẹ awọn igbeyewo.
Išọra: AO ati PI jẹ carcinogen ti o pọju.A ṣe iṣeduro pe oniṣẹ ẹrọ wọ ohun elo aabo ara ẹni (PPE) lati yago fun olubasọrọ taara pẹlu awọ ara ati oju.
Abajade:
1. Imọlẹ Field Aworan ti gbogbo ẹjẹ
Ni aworan aaye didan ti gbogbo ẹjẹ, WBC ko han laarin sẹẹli ẹjẹ pupa.(Aworan 1)
Aworan 1 Aworan aaye didan ti gbogbo ẹjẹ.
2. Fluorescence Aworan ti gbogbo ẹjẹ
Dye AO ati PI mejeeji jẹ abawọn DNA ni arin sẹẹli ti awọn sẹẹli.Nitorinaa, awọn Platelets, awọn sẹẹli ẹjẹ pupa, tabi idoti cellular ko lagbara lati ni ipa lori ifọkansi leukocytes ati abajade ṣiṣeeṣe.Awọn leukocytes laaye (Awọ ewe) ati awọn leukocytes ti o ku (Pupa) ni irọrun ni wiwo ni awọn aworan fluorescence.(Aworan 2)
Nọmba 2 Awọn aworan Fluorescence ti gbogbo ẹjẹ.(A).Aworan ti ikanni AO;(B) Aworan ti ikanni PI;(C) Dapọ awọn aworan ti AO ati PI ikanni.
3. Ifojusi ati ṣiṣeeṣe ti awọn leukocytes
Sọfitiwia Countstar FL laifọwọyi ka awọn sẹẹli ti awọn apakan iyẹwu mẹta ati ṣe iṣiro iye aropin ti lapapọ kika sẹẹli WBC (1202), ifọkansi (1.83 x 106 awọn sẹẹli/ml), ati% ṣiṣeeṣe (82.04%).Gbogbo awọn aworan ẹjẹ ati data le ni irọrun ni okeere bi PDF, Aworan tabi Tayo fun itupalẹ afikun tabi fifipamọ data.
olusin 3 Sikirinifoto ti Countstar Rigel Software
